認識RNAi

張貼者:2015年8月27日 下午9:08艾克索生物科技產品部   [ 艾克索 已於 2016年5月17日 下午11:59 更新 ]
認識 RNAi

RNA干擾(RNA interferenceRNAi) 是指一種分子生物學上由雙股  RNA 誘發的基因沉默現象,其機制是通過阻礙特定基因的轉譯或轉錄來抑制基因表達。




小干擾 RNA (Small interfering RNAsiRNA)

稱為短干擾 RNA(short interfering RNA)或沉默 RNA (silencing RNA)
為外源性的 RNA長度 20 到 25 核苷酸雙股 RNA


siRNA 結構

siRNA 通常是一段長 21 個核苷酸的雙股 RNA (dsRNA),其兩股分別在 RNA 的兩端超出另一端 個核苷酸,圖示如下:


dicer這種將較長的雙股 RNA 小髮夾 RNA (small hairpin RNA)切成 siRNA (上圖)
siRNA 也可經由多種不同轉染(transfection)技術導入細胞內,並對特定基因產生具專一性的基因剔除(knockdown)效果。



小分子 RNA (microRNAsmiRNA)

miRNA 為內源性的單股 RNA,無法進一步轉譯蛋白質的 RNA (屬於非編碼 RNA)miRNA 與 mRNA 的 3`UTR 結合,進而抑制轉錄後的基因表達,在調控基因表達、細胞週期、生物體發育時序等方面起重要作用。


miRNA 是從初級轉錄本(primary transcript),也就是 pri-miRNA,轉變成為稱為 pre-miRNA 莖環結構,最後成為長約 20~24nt 的成熟 miRNA



應用

基因功能研究siRNA 成為研究基因功能與藥物靶標的一項重要工具,可以進一步開發成為 RNAi 藥物。

疾病治療已被用於臨床測試用於幾種疾病治療,如老年視黃斑退化、肌肉萎縮性側索硬化症、類風濕性關節炎、肥胖症、腫瘤治療等。在抗病毒治療方面,帕金森病等神經系統疾病。



RNA干擾研究工具

RNA 干擾在基因功能研究的進展非常快速,各種有用的技術已被研發出來。

美國 Dharmacon 提供各種高品質的 RNAi 工具:

程式計算經由 siRNA design algorithm 設計以及基因庫比對,已有效排除造成 off-target 序列,確保合成的 RNA 序列能有效達到抑制效果。

化學修飾市面上大多為單股修飾,Dharmacon 甚至做到雙股的化學修飾,大幅降低 off target 的機率,大大提高專一性。

獨特二級結構miRNA 產品能做到具備獨特二級結構,增加穩定度,使其效果更好,半衰期長。

序列明確miRNA 可細分到 3p 或 5p,明確知道是哪一股作用。

SMARTPool 的概念為了避免單一 siRNA 用量過高導致 off target 的問題,發展藉由同時將 條相異序列的 siRNA 分別降低濃度,再 pool 成一管,同時送入細胞株,可以有效降低 off target 的影響。

轉染試劑針對不同細胞株發展出相對應的轉染試劑,增加 siRNA or miRNA 送入細胞的機率,有些產品甚至不用轉染試劑。



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shRNA
ProductsVector Type
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